Diluciones y su uso en microbiología de los alimentos
La dilución es una técnica que se utiliza para reducir de manera progresiva la concentración de una sustancia en disolución hasta una concentración necesaria para poder contabilizar fácilmente el número de colonias mediante las diferentes técnicas de conteo.
Seguramente has escuchado o realizado la técnica denominada: diluciones seriadas, la cual parte de una solución concentrada (puede ser la muestra o una solución de stock) y de la que se va diluyendo en proporción 1/10 ó 1/2 (Factor de Dilución) de manera sucesiva hasta llegar a una concentración deseada.
Esta técnica es útil cuando se va a analizar una matriz nueva, o por el contrario, cuando es conocido que el recuento de bacterias es muy alto en la solución madre.
En microbiología de alimentos, las diluciones se utilizan para determinar la carga microbiana o el número de microorganismos presentes en una muestra de alimentos. Esto se logra diluyendo la muestra original en una serie de diluciones sucesivas, y luego se analiza cada dilución para contar el número de colonias de microorganismos que crecen en un medio de cultivo adecuado.
¿Cómo hacer una dilución de alimentos?
Dependiendo de las características del alimento y del método seleccionado se deberá realizar una preparación de la muestra previa a la dilución.
Si por ejemplo tenemos las siguientes matrices: cacao en polvo y un snack para perros masticable con textura chiclosa, los pasos previos de preparación del snack serán más complejos y lentos que la matriz en polvo.
En microbiología de alimentos, por lo general, se utiliza como diluyente agua peptonada al 1% ó 0,1 % de concentración ya que es un medio de cultivo enriquecedor con características que permiten el crecimiento de varios microorganismos. Se debe tomar en cuenta que, una vez inoculado dicho medio no deben pasar más de 45 minutos antes de sembrar en placa, a menos que la norma o el procedimiento establezcan diferente.
Las diluciones pueden realizarse de manera manual, pesando la muestra en una bolsa estéril y añadiendo el diluyente con una pipeta o empleando un dilutor.
Veamos un caso:
- Una muestra de 10 g de un alimento en polvo se homogeniza con 90 mL de agua peptonada al 1% (esta sería la dilución inicial o madre)
- A continuación, se realizan dos diluciones seriadas en tubos de dilución con 9 mL de de agua peptonada al 1% previamente esterilizados. En el primer tubo se coloca 1 mL de la solución madre, luego se homogeniza, se procede a colocar 1 mL de esta primera dilución en el segundo tubo y de igual manera se homogeniza.
- Posteriormente, se siembra en 3 placas diferentes 1 mL de cada dilución y se incuba a las condiciones óptimas.
- Una vez transcurrido el tiempo de incubación se realiza el conteo y se obtiene lo siguiente:
1º dilución: > 250 colonias
2º dilución: > 250 colonias
3º dilución: 100 colonias
Se observa que en la dilución se logró una concentración que me permitirá luego realizar el cálculo de UFC/g ó mL utilizando la fórmula para ello.
Resultados de las diluciones en laboratorio
Como resultado se obtienen disoluciones con concentraciones microbianas que me exija un método en específico o simplemente concentraciones manejables para el analista de laboratorio durante el conteo en placa.
A muchos aún se nos puede atravesar la interpretación y cálculo de los resultados obtenidos a la hora de realizar un informe o simplemente evaluar si cumplimos o no requisitos de las normas.
Te dejamos a continuación dos ejemplos comunes de cálculos de diluciones en laboratorio:
Cálculo de la concentración final en una dilución en serie:
Supongamos que desea obtener una dilución final de 1:1000 a partir de una muestra original con una concentración de 10^6 UFC/mL. Quieres preparar 1 mL de la dilución final.
C1 = 10^6 UFC/mL V1 = ? C2 = 1/1000 = 10^(-3) V2 = 1 mL
Aplicando la fórmula:
C1V1 = C2V2 (10^6 UFC/mL)(V1) = (10^(-3))(1 mL)
Resolviendo para V1:
V1 = (10^(-3))/(10^6) = 10^(-9) mL = 1 μL
Por lo tanto, debe tomar 1 μL de la muestra original y diluirlo en 999 μL de diluyente para obtener una dilución final de 1:1000.
Cálculo del recuento de microorganismos en una placa de Petri:
Supongamos que hemos realizado una dilución seriada de una muestra de alimento y sembramos 1 mL de una dilución 1:10 en una placa de Petri. Después de incubar la placa, contabilizamos 50 colonias.
El recuento de microorganismos en la muestra original se calcula de la siguiente manera:
Dilución de siembra = 1:10 Volumen sembrado = 1 mL Número de colonias contadas = 50
Recuento en UFC/mL = (Número de colonias contadas)/(Dilución de siembra × Volumen sembrado)
Recuento en UFC/mL = 50/(1:10 × 1 mL) = 50 × 10 = 500 UFC/mL
Por lo tanto, el recuento de microorganismos en la muestra original es de 500 UFC/mL.
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