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Fases del ensayo microbiológico
Un ensayo microbiológico es un tipo de análisis que se utiliza para determinar la presencia, identidad y/o cantidad de microorganismos en una muestra biológica o ambiental.
Este tipo de ensayo puede ser utilizado en una amplia variedad de áreas, incluyendo la investigación científica, la industria alimentaria, la medicina, la agricultura, entre otras.
A continuación vamos a desarrollar las diferentes fases que tiene un ensayo microbiológico y la importancia de cada uno de ellos:
Limpieza y desinfección del laboratorio
La limpieza y desinfección del laboratorio debe realizarse de manera periódica; la frecuencia dependerá de la superficie, del riesgo etc., sin embargo, hay equipos en los cuales es indispensable que se limpien diariamente y después de cada uso. Por ejemplo; los equipos y materiales utilizados en los ensayos de muestras preparadas.
Además, es importante la formación del personal sobre la importancia y responsabilidad compartida de esta actividad para evitar que una mala limpieza afecte los ensayos de otros.
La limpieza debe venir acompañada del orden de la zona de trabajo dentro de un laboratorio, para crear un ambiente despejado y seguro que disminuya el riesgo de derrames o entorpezca la correcta manipulación y procedimientos a realizar.
Preparación de medios y materiales en el laboratorio
Generalmente, se utilizan medios en presentación en polvo/deshidratados y se deben seguir las instrucciones del fabricante para saber la concentración, las condiciones de almacenamiento, el valor de pH al cual se debe ajustar, la temperatura de esterilización, fecha de caducidad, entre otros.
Inicialmente, se debe pesar el medio en una balanza analítica y disolverlo con agua (puede ser destilada, desmineralizada o desionizada) mediante agitación manual. Dependiendo del medio, será necesario utilizar una parrilla de agitación y barra magnética. A esta solución se le deberá corregir el pH, si aplica, con soluciones NaOH y HCl preferiblemente.
Se procede a autoclavar el medio de cultivo aproximadamente durante 15 minutos a 121 °C. Una vez esterilizado, se dispensa en placas Petri preferiblemente en una cabina de flujo laminar o en un ambiente aséptico. Por último, se debe almacenar el medio en refrigeración (5 °C ± 3 °C), envuelto para proteger contra la luz, el calor y la deshidratación.
De manera global el proceso de preparación de un medio de cultivo:
| PASOS | EQUIPO Y MATERIALES |
| 1. Pesado de medio de cultivo deshidratado | Balanza analítica, pala metálica y plato para pesado |
| 2. Disolución del medio con agua destilada | Probeta, Boeco/matraz o recipiente de vidrio para preparación del medio |
| 3. Corrección de pH (si aplica) | pHmetro, soluciones de NaOH y HCl, micropipeta |
| 4. Esterilización | Autoclave, cinta de autoclave |
| 5. Distribución en cajas Petri (si aplica) | Cajas Petri, cabina de flujo laminar o mechero, baño termostático |
| 6. Almacenamiento | Refrigeradora, Parafilm, fundas |
Los materiales, dependiendo del proceso (dispensado de medios cultivo, inoculación, siembra en medios de cultivo etc.) deben estar disponibles y autoclavados o desinfectados para evitar tener que trasladarse a buscarlos y aumentar el riesgo de contaminación.
En conclusión, se debe planificar adecuadamente un ensayo microbiológico.
Pesaje y dilución de la muestra alimentaria
El pesaje debe realizarse en una balanza calibrada y verificada internamente utilizando patrones. A continuación, se diluye la muestra ya sea mediante el método tradicional que consiste en pesar la muestra, adicionar el diluyente con una micropipeta y agitar manualmente o empleando un dilutor. Dependiendo de las características del alimento, se deberá utilizar una homogeneización mecánica con el equipo Stomacher, por ejemplo.
Incubación microbiana
Durante la incubación, los microorganismos pueden ser observados y evaluados para determinar su presencia, identidad y/o cantidad. Esta acción permite obtener una cantidad suficiente de microorganismos para realizar pruebas y análisis adicionales, como la identificación de especies o la evaluación de la actividad metabólica.
La duración de la incubación depende del tipo de microorganismo que se está cultivando, así como del objetivo específico del análisis microbiológico.
Conteo y resultados de microorganismos
Para facilitar el proceso del conteo se puede utilizar un contador de colonias, tomando en cuenta únicamente las placas que tengan entre 30 a 300 colonias.
En este punto es importante conocer las características morfológicas de las colonias, cómo interactúa la bacteria con el medio; si produce burbujas de gas, si genera un halo de un color específico, el color que adopta debido a un indicador de pH, entre otras.
El resultado de microorganismos se expresa en Unidades Formadoras de Colonias por gramo o mililitro (UFC/g ó mL).
*Factor de dilución = inverso de la dilución.
CONSIDERACIONES FINALES:
- Todos los procesos antes mencionados deben ser debidamente registrados y verificados.
- El ensayo debe ser previamente validado en el laboratorio.
- La identificación de lotes intermedios de medios, cajas Petri, tubos de dilución es indispensable para evitar confusiones y tener trazabilidad.
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